Colaboramos com a Eli Lilly para apresentar pesquisas sobre reagentes recombinantes e tecnologia microfluídica para testes de endotoxinas bacterianas (BET) na Conferência de Microbiologia Farmacêutica da Parenteral Drug Association (PDA).
Nossos resultados, baseados em dados de amostras do mundo real, demonstram a precisão e a confiabilidade de agentes recombinantes em plataformas modernas de detecção microbiológica. Jay Bolden e Hayden Skalski apresentam a pesquisa na Conferência de Microbiologia da PDA.
Introdução: Lisado de amebócitos de Limulus (LAL) x reagentes em cascata recombinante (rCR) em testes BET com microfluidos
As empresas farmacêuticas estão adotando cada vez mais tecnologias inovadoras para atender às expectativas regulatórias em evolução e, ao mesmo tempo, desenvolver operações mais sustentáveis. Os testes de endotoxina são um excelente exemplo dessa mudança, já que as pressões regulatórias e de sustentabilidade estão transformando o cenário de BET. O anexo 1 incentiva o avanço tecnológico para simplificar os processos de fabricação, e a recente publicação da USP <86> sobre reagentes recombinantes para testes de endotoxinas representa uma importante oportunidade de alcançar as metas de conformidade regulatória e de sustentabilidade.
Por essas razões, a Veolia, em parceria com a Eli Lilly, realizou um estudo comparativo usando a plataforma de testes de endotoxinas bacterianas (BET) Sievers Eclipse para comparar os resultados entre o lisado de amebócitos de Limulus (LAL) tradicional e os reagentes em cascata recombinantes (rCR) mais recentes. A plataforma utiliza microfluídica e força centrípeta; permite a instalação do teste em 85% do tempo necessário para configurar uma microplaca tradicional de 96 poços; utiliza até 90% menos LAL ou rCR; e automatiza a entrega do LAL às amostras. Além de aumentar a eficiência, ela garante resultados precisos, permitindo que os fabricantes cumpram o anexo 1 e as metas de sustentabilidade, permanecendo em total conformidade com os regulamentos para garantir a segurança do paciente.
Esta pesquisa descreve os resultados dos testes de endotoxinas com dados obtidos de amostras do mundo real, fornecendo uma comparação prática entre os dois tipos de reagentes.
Estudo comparativo: detecção de endotoxinas de ocorrência natural (NOE) e endotoxina padrão de referência (RSE)
O objetivo deste estudo foi orientado por dois objetivos. O objetivo principal foi avaliar a detecção e a recuperação de endotoxinas de ocorrência natural (NOE) e água purificada com endotoxina padrão de referência (RSE). Essa avaliação foi realizada usando dois métodos de teste diferentes: lisado de amebócitos de Limulus (LAL) tradicional e reagentes em cascata recombinantes (rCR), com o objetivo de demonstrar a recuperação confiável de endotoxinas em ambas as plataformas de teste.
Em segundo lugar, esses recursos foram validados na plataforma Sievers Eclipse BET ao desafiá-la com ambos os tipos de reagentes. Essa validação foi particularmente significativa, pois visava demonstrar a adequação do sistema para testes de amostras no mundo real, oferecendo dois benefícios substanciais: uma redução de 90% no consumo de reagentes e a opção de usar reagentes recombinantes, promovendo assim práticas de teste mais sustentáveis no setor.
Amostras: estudo comparativo de rCR de 12 tipos amostrais
As seguintes amostras foram utilizadas no estudo comparativo entre lisado de amebócitos de Limulus (LAL) e reagentes em cascata recombinantes (rCR):
- Dois anticorpos monoclonais
- Insulina
- Peptídeo
- NOE (ver imagem 1)
- Histidina e acetato de sódio
- LRW
- Águas purificadas
- Águas purificadas com picos de RSE
- Polissorbato 80
- Produtos falsificados
- Componentes (rolha, cartucho)
- Yeastolate
Imagem 1: comparação das endotoxinas de ocorrência natural (NOE)
Resultados: LAL x rCR – resultados de desempenho e testes
A imagem a seguir detalha as taxas de recuperação de amostras e reagentes no controle positivo de produto (PPC).
Conclusão: desempenho dos rCR em plataformas de microfluidos
Este estudo mostrou desempenho equivalente entre LAL e rCR usando o Sievers Eclipse para a detecção de endotoxinas bacterianas em amostras do mundo real, bem como endotoxinas de ocorrência natural. Com base nas evidências, pode-se determinar que a plataforma de teste de endotoxinas bacterianas Sievers Eclipse é capaz de utilizar com sucesso reagentes em cascata recombinantes, desde que a compatibilidade da amostra tenha sido verificada.
A automação por meio da plataforma centrípeta de microfluidos Eclipse oferece a forma mais simples de microfluidos para BET disponível, proporcionando economia de tempo significativa e reduzindo as chances de erros. Com a disponibilidade dessa tecnologia inovadora, os testes BET podem ser simplificados enquanto permanecem totalmente compatíveis com compêndios.
Os benefícios incluem:
- Compatível com USP <85> e <86>
- Comprovadamente funciona com reagentes de LAL e rCR
- Até 90% menos reagente necessário; auxilia em iniciativas de sustentabilidade
- 27 etapas de pipetagem total para 21 amostras para maior eficiência
- Tecnologia inovadora alinhada com as orientações do anexo 1
Saiba mais sobre Sievers Eclipse
Autores:
- Jay Bolden
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Jay Bolden é diretor sênior da Organização Global de Controle de Qualidade Analítica da Eli Lilly and Company. Ele é especialista no assunto de endotoxinas bacterianas e lidera uma equipe com supervisão global de controle de qualidade para métodos de teste de endotoxinas, microbiologia e virologia. Jay é formado em Biologia e certificado em Estudos Ambientais pela Universidade de Indiana e tem mais de 25 anos de experiência na indústria em desenvolvimento, microbiologia de processos e laboratórios, e liderança em laboratórios de microbiologia. Jay é membro do Comitê de Especialistas em Microbiologia da United States Pharmacopoeia e é autor de um capítulo de livro e de vários artigos revisados por pares sobre endotoxinas. Conteúdo sanfonado 1.
- Meg Provenzano
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Meg Provenzano é gerente global de produtos para instrumentos de biodetecção Sievers na Veolia. Ela possui mais de 10 anos de experiência na indústria de testes de endotoxinas bacterianas e ocupou vários cargos em controle de qualidade, suporte técnico e gerenciamento de produtos. Antes de ingressar na Veolia, Meg foi gerente de produtos da Charles River Laboratories. Ela tem um foco no cliente e gosta de resolver problemas na prática, seja para questões técnicas, assistência de ensaio ou software. Meg é formada em Ciências Marinhas e Biologia pela Coastal Carolina University, onde se concentrou na pesquisa populacional de golfinhos-nariz-de-garrafa.
- Brian Short
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Brian Short é especialista global em aplicações farmacêuticas na Veolia, fornecendo suporte estratégico à biodetecção farmacêutica e à aplicação de COT para o setor de ciências da vida. Com 20 anos de experiência trabalhando em e com laboratórios de controle de qualidade farmacêutica, Brian supervisionou e apoiou testes de produtos acabados e em processo de alto volume. Tendo ocupado cargos anteriores na Wyeth e na Lonza, e com nove anos de experiência no suporte à linha de produtos Sievers como parte da GE Analytical Instruments, SUEZ e agora Veolia, Brian tem profundo conhecimento em software e instrumentação de detecção de endotoxinas, incluindo instalação, qualificação e treinamento. Brian é formado em Ciências Biológicas pela York College of Pennsylvania.
- Hayden Skalski
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Hayden Skalski é especialista em aplicação de produtos de ciências da vida da Veolia, especializado em testes de endotoxinas bacterianas (BET). Hayden tem mais de 10 anos de experiência na indústria farmacêutica e em microbiologia de controle de qualidade e apresentou vários tópicos relacionados a testes de endotoxinas. Anteriormente, Hayden ocupou cargos na na Charles River Laboratories, na Regeneron e na Novartis, validando e executando protocolos de desenvolvimento de métodos para testes de endotoxinas, fornecendo suporte ao cliente, solução de problemas e suporte a testes de produtos de alto volume. Hayden é bacharel em Biologia pela Universidade de Albany (SUNY). Kelly Smith é bióloga principal sênior da organização global de controle de qualidade analítica Eli Lilly and Company. Ele é especialista em endotoxinas bacterianas, com mais de 25 anos de experiência na indústria e é formado em química pela Butler University.
- Kelly Smith
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Kelly Smith é bióloga principal sênior da organização global de controle de qualidade analítica Eli Lilly and Company. Ele é especialista em endotoxinas bacterianas, com mais de 25 anos de experiência na indústria e é formado em química pela Butler University.