Plataforma de teste de endotoxinas bacterianas (BET) Sievers Eclipse

Frequently Asked Questions (FAQs) for Bacterial Endotoxins Testing with Eclipse 

O que é o teste de endotoxina bacteriana?

O teste de endotoxinas bacterianas é um procedimento essencial de controle de qualidade usado nas indústrias farmacêutica, de dispositivos médicos e de biotecnologia para detectar e quantificar a presença de endotoxinas em vários produtos. As endotoxinas são componentes da membrana celular externa de bactérias gram-negativas e que podem causar respostas imunes graves em humanos e animais, mesmo em pequenas quantidades.

O que são endotoxinas bacterianas?

Endotoxinas bacterianas são encontradas na membrana externa da parede celular de bactérias Gram-negativas. O efeito da endotoxina de bactérias gram-negativas é principalmente devido ao componente lipídio A de lipopolissacarídeos (LPS), que pode exercer respostas pirogênicas (indutoras de febre) que podem ser perigosas e até mesmo fatais quando encontradas na corrente sanguínea e em outros fluidos corporais acima de certas concentrações. O teste de endotoxina é necessário nesses setores, porque certos produtos farmacêuticos e dispositivos médicos entram na corrente sanguínea. Devido à toxicidade potente e ao impacto na segurança do paciente, as endoxinas são reguladas de forma geral pela FDA dos EUA e pela farmacopeia internacional para qualquer produto de ciências da vida que terá contato com sangue humano e/ou animal.

Por que você faria um teste para endotoxinas bacterianas em água ou em produtos finais?

No setor de produtos farmacêuticos, dispositivos médicos e outras ciências da vida, testar para identificar a presença de endotoxinas é crucial para a segurança do paciente e para o controle de qualidade. Os testes de endotoxina são realizados em sistemas de água de grau farmacêutico, incluindo água para injeção (WFI) que é usada como água de processo incorporada e produtos acabados, como medicamentos, medicamentos para animais, produtos biológicos e dispositivos médicos. Produtos médicos e farmacêuticos testados incluem produtos de medicamentos parentais (administrados por meio de injeção, tais como intravenoso, subcutâneo, intramuscular e intradérmico) e dispositivos médicos que tenham contato direto ou indireto com o sangue, o sistema cardiovascular, o sistema linfático e o líquido cerebroespinhal. A farmacopeia internacional (USP <85>, EP 2.6.14 e JP 4.01) descreve os requisitos para o teste de endotoxinas bacterianas (BET) e os limites de endotoxina. As diretrizes da FDA contêm recomendações a fabricantes de produtos biológicos, medicamentos e dispositivos sobre a posição atual relacionada a recomendações de testes e a critérios de aceitação cobertos em procedimentos de compêndio.

Como funciona o método de teste de endotoxina bacteriana?

Por quase 40 anos, a FDA dos EUA aceitou o teste lisado de amebócitos de Limulus (LAL) como um teste de produto acabado para as endotoxinas.  Este ocupa o lugar do teste de pirogênio em coelho, e é um ensaio in vitro que pode detectar a presença e a concentração de endotoxinas bacterianas. Nos testes LAL, o lisado do sangue de caranguejos-ferradura (Limulus Polyphemus) reage com endotoxinas bacterianas para indicar a presença de endotoxinas em uma amostra. Existem três metodologias do princípio do teste de endotoxina bacteriano para teste de LAL: coágulo de gel, turbidimétrico e cromogênico. No método gel-clot, o LAL e a amostra são misturados. Em seguida, o operador busca formação de gel no tubo de reação. Os resultados são provenientes da interpretação subjetiva de formação de coágulos, e, portanto, o método gel-clot é um teste qualitativo. Nas metodologias de turbidimetria e cromogênia, as amostras são misturadas com reagente LAL e a mudança de cor ou turbidez são mensuradas ao longo do tempo. Os ensaios de cromogênia e turbidimetria são quantitativos e demonstram a quantidade de endotoxina presente. Os resultados são calculados com base em uma curva padrão. Os limites e requisitos de endotoxina para a realização de BET estão descritos na farmacopeia global, USP <85>, EP 2.6.14 e JP 4.01. Um novo capítulo geral na farmacopeia europeia descreve um método para BET usando fator recombinante C (rFC) em vez do método clássico baseado em LAL.

Quanto de reagente LAL é usado com a plataforma BET Sievers Eclipse?

Com somente 1 mL de reagente LAL, 21 amostras podem ser analisadas na plataforma Eclipse. Ao diminuir o uso de lisado de caranguejo-ferradura (HSC) em até 90%, o Eclipse reduz a demanda desse valioso recurso natural e fornece um ensaio BET totalmente compatível que a população global de HSC pode sustentar.

A plataforma BET Sievers Eclipse está em conformidade?

Sim. A plataforma Eclipse usa LAL disponível comercialmente, licenciado pela FDA e atende a todos os requisitos da farmacopeia global harmonizada, USP <85>, EP 2.6.14 e JP 4.01. O teste de endotoxina bacteriana com a plataforma Eclipse inclui curva padrão mínima de três pontos de forma duplicada usando endotoxina padronizada; amostras e PPCs em duplicata; controles negativos em duplicata; qualificação do lote de analista e lisado em triplicado; uso de LAL licenciado pela FDA. Também cumpre com a CFR 21 parte 11 e com as diretrizes de integridade de dados

As curvas padronizadas são automatizadas com a plataforma Sievers Eclipse?

Sim. Tradicionalmente, para ensaios de endotoxinas em conformidade, o usuário final deve construir pelo menos uma curva padrão de três pontos de forma duplicada de um frasco de estoque de endotoxina padronizada; deve ter controles negativos duplicados; e deve analisar cada amostra de modo duplicado com um PPC, também duplicado. Com a plataforma BET Sievers Eclipse, essas fases são automatizadas com o uso de padrões de endotoxinas pré-carregados variando até uma curva padrão de cinco pontos e PPCs pré-carregados. Desse modo, basta ao usuário final carregar água na BET e amostras na placa sem trabalho preparatório adicional. O resultado é a capacidade de configurar um ensaio em 9 minutos, em comparação a mais de 60 minutos que outras plataformas exigem.

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